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常见问题

FAQ
  • 01 在重新冻存 Sf9 细胞前,它可以传多少代?随着传代的次数的增加,它的感染能力会降低吗?

    通常情况当细胞经过 30 次传代后,应该返回冻存。无论什么时候计数时,都应该检查细胞活力。如果超过 95 的细胞保持有活力,且倍增时间小于 30 小时,细胞仍然可以使用。如果活力下降和倍增时间延长,它们的感染力将不再有效。

  • 02 在 Sf9,Sf21,和High Five 细胞悬浮培养时,肝素的使用量是多少?

    为了防止悬浮培养细胞聚集的形成,使用肝素浓度为 10 单位/毫升细胞悬液。

  • 03 如何从 T25 瓶中转移 Sf9 细胞?能用胰蛋白酶消化吗?

     我们强力推荐使用脱落细胞的方法,因为这项技术破坏性最小,生活力最高。正如手册上所显示,通

    过使用巴斯德吸液管,让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻轻拍打培养瓶。只有在绝对必要

    的情况下,才使用胰酶消化细胞。

     

       胰酶消化一个 T25 瓶的 sf9 细胞:

       1. 去除培养基。

       2. 2 ml PBS(足以覆盖细胞表面)洗涤细胞,去除 PBS

       3. 加入 2mL 0.25 % 的胰酶 EDTA(恰好覆盖细胞表面)。

       4. 37 ℃ 孵育 5 10 分钟。

       5. 向细胞中加入 2 ml 完全培养液,移入锥形管,用 2mL 培养液洗瓶壁,移入同一锥形管中。(培养基中的 FBS 终止了胰酶的活性。)

       6. 离心(1100 rpm)沉淀细胞。去除培养基。

       7. 用新的培养基重新悬浮细胞。传代。


  • 04 使用一些昆虫培养基常会发现形成白色沉淀,加热后溶解。它是什么?对细胞有害吗?

    可能是谷氨酰胺沉淀,但是更可能是 L-酪氨酸或者 L-胱氨酸的沉淀。一般升高温度,沉淀就可以溶解。这些昆虫培养基中谷氨酰胺的浓度比经典培养基中氨基酸的浓度(2 mM 6 倍,酪氨酸、胱氨酸的浓度比在 RPMI 1640 中高数十倍,一旦析出便很难溶解。当然沉淀也可能是不止一种成分的复合物。它可能是由于贮存在局部温度较低的地方引起。只要沉淀在培养条件下可以溶解,对实验不会有不利的影响。 

  • 05 High Five 细胞用多大的密度冻存?

    3.0 × 106 cells/mL

  • 06 High Five 细胞有任何其它名称吗?

    High Five 细胞也被称为Trichoplasia ni 5B1-4BTI-TN-5B1-4

  • 07 昆虫细胞培养的最适 pH 值和渗透压是多少?

    生长培养基的 pH 值对细胞的增殖和病毒或重组蛋白的生产均会产生影响。对于大部分鳞翅类昆虫细胞系,在 pH 6.06.4 范围的大部分应用效果良好。培养鳞翅类昆虫细胞系时,培养基的最适渗透压是 345-380 mOsm/kg。为保证可靠和持久的细胞培养方式,减少技术问题,保持 pH 值和渗透压在以上所列的范围之内。 

  • 08 室温下(25℃)配制的 Tris-HCl 溶液,在 37 ℃ 使用时 pH 值是多少?

    缓冲液的 pH 值随温度变化而变化。下表列出了 50 mM Tris-HCl 溶液在 4 ℃,25 ℃,37 ℃时,不同的 pH 值。

    4

    25     

    37

    8.1

    8.2

    8.3

    8.4

    8.5

    8.6

    8.7

    8.8

    8.9

    9.0

    9.1

    9.2

    9.3

    9.4

    7.5

    7.6

    7.7

    7.8

    7.9

    8.0

    8.1

    8.2

    8.3

    8.4

    8.5

    8.6

    8.7

    8.8

    7.2

    7.3

    7.4

    7.5

    7.6

    7.7

    7.8

    7.9

    8.0

    8.1

    8.2

    8.3

    8.4

    8.5


  • 09 20 ℃下配制的缓冲液,在较高或较低的温度下 pH 值会改变吗?

    对于普通使用的缓冲液,pH 值随温度变化而变化。

    下表列出温度改变 10 ℃时,pH 值的变化情况:

    例如 20 ℃下配制pH7.4 Tris缓冲液,40 ℃时pH值为 7.4 -2 × 0.310)= 6.78

    缓冲系统 pKa/20 ΔpKa/10

     

    Mes        6.15-0.110

    Ada        6.60-0.110

    Pipes      6.80-0.085

    Aces       6.90-0.200

    Bes        7.15-0.160

    Mops      7.20-0.013

     

    Tes                 7.50-0.200

    Hepes              7.55-0.140

    Tricine             8.15-0.210

    Tris                8.30-0.310

    Bicine              8.35-0.180

    Glycylglycine        8.40-0.280


  • 10 二价离子抑制胰蛋白酶活性吗?使用胰蛋白酶时加入 EDTA 的目的是什么?

    二价离子能抑制胰蛋白酶活性。EDTA 用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便减少二价离子对胰蛋白酶活性的影响。建议胰蛋白酶处理细胞前,用不含钙镁离子的 PBS 清洗细胞,以消除来自培养基中所有的二价离子。 

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